ELISA即酶聯(lián)免疫吸附法，是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由于ELISA方法簡單，方便，靈敏，特異性強且不需要特殊設備（只需要酶標儀就可以），所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。
但是影響ELISA測定的因素有很多，而其操作中需要有一定的技術要求，如操作手法，環(huán)境，樣本等，有時?？梢姷揭恍╁e誤結果（即假陽性或假陰性）等，樣本的重要性關系到整個實驗的結果，上海極威生物為大家解讀ELISA檢測的影響因素之一-樣本的影響
1、樣本的保存：在冰箱中保存過久的標本，在間接法ELISA測定中會導致本底過深、會造成假陽性；為避免上述問題，在ELISA試劑盒測定血清標本時能新鮮采集；如果不能立即測定，根據(jù)相應的時間保存相應的溫度，5 d內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應-20℃低溫凍存；如凍存后融解的標本，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振蕩。
2、樣本的時間：因為塑料試管能吸附抗原物質，所以樣本長時間放在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。的方法是使用真空采血管；并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會增加OD值，EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
3、樣本受細菌污染：因菌體中可能會含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，可能會產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。
4、樣本的凝固：樣本凝固不全。在實驗中，有的時候心急為了爭取時間快速檢測，ELISA試劑盒在血液還未開始凝固的時候就強行離心分離血清，導致血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
5、樣本溶血：溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性?？赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質（紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），ELISA試劑盒在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質，即顯藍色，產(chǎn)生假陽性［2］。所以嚴重溶血標本禁用。
在線客服
