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腺病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)操作:

1. 模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套水生動(dòng)物病害基因組 DNA/RNA 提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2．添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）

請(qǐng)于-20℃條件下保存，有效期 12 個(gè)月

取出所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液 A-TSV-I 的 PCR 管，將試劑*解凍，離心 30 秒，在管蓋上標(biāo)記管名（陰性對(duì)照管 NG、樣品 XX、陽性對(duì)照管 PG）。打開管蓋向各管管底分別加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I，蓋上陰性對(duì)照管管蓋，其他各管分別沿管壁加入 2μL 模板，順序?yàn)榇郎y樣品模板、PG-TSV-I，依次蓋好各管管蓋，離心 30 秒，立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

3. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）

①恒溫儀器 63℃條件下反應(yīng) 60 min。待儀器升溫至 63℃后，新建程序，設(shè)置實(shí)驗(yàn)名稱及反應(yīng)時(shí)間，將步驟 2中離心后的 PCR 反應(yīng)管放入恒溫?zé)晒夥肿訖z測儀，點(diǎn)擊開始檢測。

②若使用熒光定量 PCR 儀，則熒光基團(tuán)選擇 FAM，淬滅基團(tuán)選擇 None，將 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作為一個(gè)循環(huán)，于 63℃ 45 s 處收集熒光信號(hào)，60 個(gè)循環(huán)。其他儀器請(qǐng)參照儀器說明書進(jìn)行設(shè)置。

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